賽默飛NanoDropOneC操作使用流程

賽默飛（Thermo Scientific）NanoDrop One/OneC 微量紫外-可見分光光度計(jì)的技術(shù)使用說明，涵蓋儀器操作、測量步驟、注意事項(xiàng)及維護(hù)要點(diǎn)：

一、賽默飛NanoDrop One C儀器簡介

NanoDrop OneC 是一款用于微量樣本（0.5-2 μL）的紫外-可見分光光度計(jì)，無需比色皿，直接測量核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞培養(yǎng)物等的濃度和純度（如A260/A280比值）。

核心功能：

檢測核酸（DNA/RNA）、蛋白質(zhì)（Bradford/Lowry/BCA法）、細(xì)胞密度（OD600）等。

波長范圍：190-850 nm（紫外-可見光）。

樣本體積：0.5-2 μL（無需稀釋）。

二、操作步驟

1、開機(jī)與初始化

開機(jī)：連接電源，按下儀器正面電源鍵，啟動配套軟件（NanoDrop One）。

初始化：

打開軟件后，儀器自動進(jìn)行光源校準(zhǔn)和基線校正（約1分鐘）。

確保測量 pedestal（檢測臂）清潔無殘留（用無塵紙蘸蒸餾水擦拭）。

2、選擇檢測模式

在軟件界面選擇檢測類型：

核酸（Nucleic Acid）：DNA/RNA濃度（A260）及純度（A260/A280、A260/A230）。

蛋白質(zhì)（Protein）：A280或其他波長（如Bradford法測595 nm）。

其他應(yīng)用（如OD600、用戶自定義波長）。

3、空白校正

抬起檢測臂，在上下 pedestal 各加1-2 μL空白溶液（如蒸餾水、緩沖液）。

放下檢測臂，點(diǎn)擊軟件中的“Blank"按鈕，完成基線校正。

4、樣本測量

抬起檢測臂，用無塵紙清潔 pedestal。

加1-2 μL樣本至下 pedestal（避免氣泡），放下檢測臂。

點(diǎn)擊“Measure"讀取數(shù)據(jù)，軟件自動顯示濃度、吸光度和比值。

測量后立即清潔 pedestal，防止交叉污染。

5、數(shù)據(jù)保存與導(dǎo)出

數(shù)據(jù)自動保存至軟件，可導(dǎo)出為Excel/CSV格式。

支持生成報(bào)告（PDF）或直接打印。

三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

1、樣本要求：

樣本需透明、無顆粒（避免散射光干擾）。

高濃度樣本可能導(dǎo)致信號飽和（DNA/RNA > 3700 ng/μL時(shí)需稀釋）。

2、清潔維護(hù)：

每次測量前后用無塵紙蘸蒸餾水或70%乙醇清潔 pedestal。

避免使用丙酮等腐蝕性溶劑。

3、校準(zhǔn)與質(zhì)控：

定期使用NIST標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)（如SRM 2082）驗(yàn)證準(zhǔn)確性。

若基線漂移，重新執(zhí)行空白校正。

4、常見問題：

誤差來源：樣本殘留、氣泡、 pedestal 污染。

A260/A280異常：蛋白質(zhì)污染（比值<1.8）或苯酚殘留（比值>2.0）。

NanoDrop OneC 通過微量樣本快速檢測，適用于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)濃度分析。操作時(shí)需嚴(yán)格注意清潔和校準(zhǔn)，以確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。對于高通量需求，可搭配自動化模塊（如8聯(lián)板適配器）。